HPV L1壳蛋白和MMP―2在宫颈病变表达及临床意义

【摘要】 目的 探讨人乳头状瘤病毒（HPV）L1壳蛋白及MMP-2在不同宫颈病变表达及临床意义。方法 宫颈疾病患者121例， 术前HPV-DNA均为阳性， 采用免疫组化方法检测HPV L1壳蛋白和MMP-2在各级宫颈病变组织的表达情况。结果 121例患者中， HPV L1蛋白在正常宫颈组、CIN I组、CINⅡ组、CINⅢ组、SCC组阳性表达分别为69.69%（23/33）、83.33%（15/18）、36.84%（7/19）、4.70%（1/21）、0（0/30）。CIN中为37.93%（23/58）。除了CINⅢ与SCC比较差异无统计学意义（P>0.05）外， 其他不同宫颈病变间比较， 差异有统计学意义（P<0.05）；MMP-2 在正常宫颈组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组、SCC组的阳性表达分别为6.06%（2/33）、33.33%（6/18）、57.89%（11/19）、66.66%（14/21）、76.66%（23/30）， CIN中53.44%（31/58）。正常组织中MMP-2 的阳性率明显低于CIN 组及SCC组。MMP-2 在正常宫颈组、CIN组、SCC组比较， 三组间差异有统计学意义（P<0.05）。CINⅠ组中HPV L1蛋白阳性表达率最高， 随着病变程度的增加， 其阳性表达率明显下降。SCC组中MMP-2阳性表达率最高， 随着病变程度的增加， 其阳性表达率明显增加经相关性结果分析显示宫颈病变中HPV L1壳蛋白和MMP-2表达呈负相关（P<0.05）。结论 HPV L1壳蛋白阳性表达率随着宫颈病变的演变及发展而呈降低趋势， MMP-2阳性表达率随着宫颈病变的演变及发展而呈增加趋势。联合二者在宫颈病变的发生发展中具有一定意义， 可作为宫颈癌前病变进展的生物学标志物。

　　【关键词】 人乳头状瘤病毒L1壳蛋白；MMP-2；宫颈上皮内瘤变；鳞状细胞癌；免疫组化
　　宫颈上皮内瘤变（CIN）反映了子宫颈癌发生发展中的连续过程， 通过筛查发现CIN， 及时治疗高级别病变， 是预防子宫颈癌行之有效的措施[1]。研究已表明， 生殖道感染人乳头瘤病毒（HPV）是妇女宫颈癌和癌前病变的主要危险因素， HPV L1壳蛋白是HPV 感染复制早期所必须的结构蛋白， 故可通过检测HPV L1壳蛋白来研究HPV感染状态。细胞外基质（ extracellular matrix， ECM） 降解对于肿瘤的浸润转移和血管生成至关重要。基质金属蛋白酶（ MMPs） 是降解ECM 的重要酶类， MMP-2可能在宫颈癌细胞增殖、血管生成、浸润转移等过程中发挥重要作用。本研究通过免疫组化检测HPV L1蛋白及MMP-2在不同宫颈病变过程的表达情况， 探讨其在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌发展中的相关性。
　　1 资料与方法
　　1. 1 一般资料 入选2010年9月～2013年9月许昌市中心医院手术治疗的宫颈疾病患者121例， 术前HPV-DNA均为阳性， 其中宫颈鳞状细胞癌（SCC）30例、CIN 58例（其中CIN I、CINⅠ、CINⅢ分别为18例、19例、21例）， 正常宫颈33例（因子宫良性病变而行子宫全切除标本， 术前宫颈外观正常， 术后病理诊断为宫颈炎标本）。所有患者均无宫颈锥切、子宫切除、放化疗史。
　　1. 2 方法 MMP-2及HPV L1检测法应用链霉素亲生物素-过氧化物酶法（SP法）进行检测。
　　1. 3 试剂 HPV L1鼠抗人单克隆抗体购自赛泰公司， SP试剂盒及DAB酶底物显色剂等均购自福州迈新生物技术开发有限公司。兔抗人MMP-2抗体购自北京博奥森科技实业有限公司。
　　1. 4 判断和评估标准 MMP-2结果按照以下评判标准[2]进行半定量判断：两位病理医师专家各自独立观察随机每例切片随机选取10个高倍视野进行结果判定。按染色强度及阳性细胞数所占百分比综合计分。即：0分为阳性细胞数<5%， 1分为5%～25%， 2分为 26%～50%， 3分为51%～75%， 4分为>75% 。按着色强度记分：1分为染色呈淡黄色， 2分为染色呈黄色， 3分为染色呈棕黄色。两种记分的乘积即为阳性强度：0分为阴性（-）， 1～4分为弱阳性（+）， 5～8分为中度阳性（++）， 9～12分为强阳性（+++）。有一个被染色的细胞核呈红色即认为HPV L1 壳蛋白表达呈阳性。
　　1. 5 统计学方法 采用 SPSS18.0统计软件进行统计处理。计数资料采用χ2检验和Fishers 确切概率法， 相关分析使用单因素直线相关分析， P<0.05为差异有统计学意义。
　　2 结果
　　2. 1 HPV L1壳蛋白和MMP-2在不同宫颈病变组织中的表达 HPV L1壳蛋白在正常宫颈组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组、SCC组阳性表达分别为69.69%（23/33）、83.33% （15/18）、36.84%（7/19）、4.70%（1/21）、0（0/30）。CIN中为37.93%（23/58）。除了CINⅢ与SCC比较差异无统计学意义（P>0.05）外， 其他不同宫颈病变间比较， 差异有统计学意义（P<0.05）；MMP-2 在正常宫颈组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组、SCC组的阳性表达分别为6.06%（2/33）、33.33%（6/18）、57.89%（11/19）、66.66%（14/21）、76.66%（23/30）， CIN中53.44%（31/58）。正常组织中MMP-2 的阳性率明显低于CIN组及SCC组。MMP-2 在正常宫颈组、CIN组、SCC组比较， 三组间差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
　　2. 2 HPV L1 壳蛋白和MMP-2的相关性 CIN I组中HPV L1蛋白阳性表达率最高， 随着病变程度的增加， 其阳性表达率明显下降。SCC组中MMP-2阳性表达率最高， 随着病变程度的增加， 其阳性表达率明显增加经相关性结果分析显示宫颈病变中HPV L1壳蛋白与MMP-2表达呈负相关（P<0.05）， 见表2。 　　3 讨论
　　宫颈癌是妇科常见肿瘤之一， 有年轻化的趋势， 主要源于对妇女进行有效的宫颈筛查和癌前病变的早期诊断， 宫颈癌的5 年生存率在90%以上， 因此有效地预测宫颈癌的早期病变即可通过早期干预降低宫颈癌的死亡率[3]。
　　目前已证实高危型HPV感染是宫颈癌发生的重要原因。近年感染HPV的有效评估指标为L1蛋白， 宫颈恶变程度的增高， HPV L1蛋白阳性表达率降低。Lee H等[4]则提出宿主病毒相互干扰学说， 即随着CIN分度的升高甚则恶变， 可缺失L1壳蛋白。HPV L1壳蛋白阴性提示感染HPV具有进展性， 出现宫颈癌或CIN的高发病率。作者的研究表明随着宫颈病变级别的增高， HPV L1壳蛋白在慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈鳞癌阳性表达逐渐减少， 差异具有统计学意义（P<0.05）， 同相关研究一致。
　　基质金属蛋白酶（MMPs）是降解ECM 的重要酶类。MMP-2为MMPs家族成员， 推测 MMP-2的阳性表达提示， 肿瘤细胞拥有侵袭、转移的能力， 细胞就具有恶性侵略的特性[5]。滕燕伊等[6]采用免疫组化研究显示：MMP-2在宫颈癌中的表达高于CIN及正常宫颈组织， 并认为 MMP-2是早期肿瘤的标志。作者的研究表明MMP-2 在正常宫颈组、CIN 组、SCC组的阳性表达分别为6.06%（2/33）、53.44%（31/58）、76.66%（23/30）， 正常组织中MMP-2的阳性率明显低于CIN 组及SCC组。MMP-2在正常宫颈组、CIN组、SCC组比较， 三组间差异有统计学意义（P<0.05）， 同相关研究一致；作者同时检测HPV L1壳蛋白和MMP-2的表达显示两者在宫颈病变的发生发展过程中具有负相关， 提示两者联合能用于宫颈癌的早期诊断、预后判断及术后早期复发转移的随访监测， 但仍需多中心研究结论。
　　综上所述， 通过对不同宫颈组织中HPV L1蛋白与MMP-2的免疫组化测定表明：HPV Ll蛋白表达随着宫颈病变程度的加重而下降；MMP-2随着宫颈病变程度的加重而增加。因此， 作者推测HPV L1蛋白与MMP-2在宫颈病变的发生发展中具有一定意义， 可以帮助了解宫颈的病变程度， 预测宫颈病变的发展趋势。
　　参考文献
　　[1] 谢幸.妇产科学.第8版.北京：人民卫生出版社， 2013：301-302.
　　[2] 朱华， 施铮铮， 杨孝军， 等. Survivin、Bcl-2、HPV 16 /18在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的表达及临床意义.实用妇产科杂志， 2010， 26 （1）：57.
　　[3] 陈恒禧， 甘晓玲， 傅�. HPV L1 检测预测宫颈鳞状上皮内病变预后的意义.现代妇产科进展， 2009， 18（11）：865.
　　[4] Lee H， Lee KJ， Jung CK， et al. Expression of HPVL1 capsid protein in cervical specimens with HPV infection. Diagn Cytopathol， 2008， 36（12）：864.
　　[5] Banerji A， Chakrabarti J， Mitra A， et al. Cell menbrane-associated MT1-MMP-dependent activation of pro-MMP-2 in A375 melanoma cells. J Env Path Tox Oncol， 2005， 24（1）：3-17.
　　[6] 滕燕伊， 刘晓云， 郑洪， 等. Ki-67、MMP-7、MMP-2 在宫颈 CIN 和宫颈癌中的表达及意义.重庆医科大学学报， 2010， 35（7）：989-991.