紫英颗粒对慢性盆腔炎常见致病菌抑菌作用的研究

【摘要】  目的 观察紫英颗粒对慢性盆腔炎常见致病菌的抑菌作用。方法 以平皿打孔法和试管液体双倍稀释法观察对9种细菌的体外抑菌圈和最低抑菌浓度与最低杀菌浓度；以大肠杆菌与金黄色葡萄球菌感染致死进行体内保护作用试验。结果 体外抑菌试验显示，紫英颗粒对9种常见的慢性盆腔炎致病菌有抑制作用,其敏感性依次为：粪肠球菌＞乙型溶血性链球菌＞大肠埃希菌＞金黄色葡萄球菌＞脆弱类杆菌＞变形杆菌＞表皮葡萄球菌＞肺炎克雷伯菌＞铜绿色假单胞菌。紫英颗粒口服对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌感染小鼠均有保护作用,能明显提高感染动物的存活率。结论 紫英颗粒对慢性盆腔炎常见致病菌具有较广谱的抑菌作用。

【关键词】  紫英颗粒；盆腔炎；抑菌试验

    Abstract：Objective To investigate the bacteriostatic effect of Ziying granule on common pathogenic bacteria in pelvic cavity. Methods Bacteriostatic circle, the lowest bacteriostatic concentration and the lowest disinfecting concentration of nine kinds of bacteria in vitro were measured with punching flat vessel method and test-tube fluid double dilution method. The mice infected by colibacillus and staphylococcus aureus to be died were tested in vivo for its protection. Result Ziying granule was effective in inhibiting the nine kinds of bacteria in bacteriostatic test in vitro, and the susceptibility order was fecal enterococcus＞β-hemolyticstreptococcus＞Escherichia coli＞Staphyloccocus aureus Rosenbach＞b.fragilis＞proteus＞staphy lococcus epidermidis Ⅱ＞klebsiella＞Pseudomonas aeruginosa. Ziying granule can protect the mice infected by colibacillus and staphylococcus aureus and increase animal survival rate. Conclusion Ziying granule has broad-bacteriostasis effect on common pathogenic bacteria in pelvic cavity.
   
　　Key words：Ziying granule；pelvic infection；bacteriostasis test
 
    紫英颗粒由紫花地丁、蒲公英等9味药物组成,具有清热利湿、化浊除滞、消肿散结、活血止痛之功效,用于治疗慢性盆腔炎湿热瘀结证,症见下腹胀痛或坠痛,带下量多、质粘、色黄,或经期腹痛加重者。在慢性盆腔炎的发病过程中,细菌感染是重要的原因之一。为了解紫英颗粒的抑菌作用,分别采用了体内与体外两种方法进行了试验,现报道如下。

　　1  材料

　　1.1  药物

    紫英颗粒干膏粉,长沙华源医药科技公司提供,相当于原药材5.046 g/g,批号20060530；0.2%氧氟沙星氯化钠注射液(奥复星),武汉滨湖双鹤药业有限公司生产,批号051213；0.5%甲硝唑注射液,湖南科伦制药有限公司生产,批号051217；0.2%氟康唑氯化钠注射液(依利康),石家庄四药有限公司生产,批号060816503。

　　1.2 细菌
   
　　大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、变形杆菌由湖南省疾病控制中心提供；肺炎克雷伯菌、铜绿色假单胞菌、乙型溶血性链球菌、脆弱类杆菌、粪肠球菌由湖南湘雅医学院微生物教研室提供,湖南中医药大学微生物教研室保种繁殖。全部临床株均从湖南中医药大学附属第一医院妇科门诊盆腔炎患者宫颈分泌物标本中分离,少数从男性前列腺患者的前列腺液中分离,经鉴定确认后进行试验。并以标准株作为质控。

　　2  统计学方法

    所得数据均采用SPSS12.0软件进行。组间比较统计,计量资料用t检验,计数资料用χ2检验。

　　3  试验方法与结果

　　3.1  体内抑菌试验

　　参照文献[1]方法。经以不同含菌量的大肠杆菌与金黄色葡萄球菌菌液给小鼠腹腔注射进行试验,结果每鼠腹腔注射0.5 mL菌液浓度为6×109/mL的大肠杆菌可引起100%小鼠死亡；金黄色葡萄球菌的感染致死菌液浓度为8×107/mL。
   
　　取ICR小鼠90只,雌雄各半,体重18～22 g。按性别体重分层,分为5组,每组18只。分别灌胃给予紫英颗粒(40、20、10 g/kg)、阳性对照药(氧氟沙星0.1g/kg)及蒸馏水20 mL/kg。每日给药1次,共给药6 d。第4日给药后1 h,每鼠腹腔注射细菌数为5×109/mL大肠杆菌菌液5 mL。同法进行金黄色葡萄球菌体内感染试验。观察记录注射细菌后1周内小鼠的存活情况,计算药物组小鼠存活提高率。存活提高率(%)＝[1－(100－给药组存活率)/(100－对照组存活率)]×100%。

　　结果表明,紫英颗粒对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌感染致死小鼠均具有较好的体内保护作用,能明显提高感染小鼠的存活率,并随剂量的加大作用增强,剂量达20 g/kg以上时较对照组有显著提高。见表1、表2。表1  紫英颗粒对大肠杆菌感染小鼠体内保护试验结果（略）表2  紫英颗粒对金黄色葡萄球菌感染小鼠体内保护试验结果（略）

　3.2  体外抑菌作用
　　3.2.1  最低抑菌浓度和最低杀菌浓度测定

　　参照文献[2]方法。采用试管内药物溶液稀释法分别进行9个临床菌株的最低抑菌浓度(MIC)测定,以各菌种的标准菌作为质控菌株。试验中每株取灭菌试管10支,分别加入以紫英颗粒、氧氟沙星、甲硝唑和氟康唑配制的9种系列药物浓度的培养基1.0 mL。第10管加纯培养基1 mL。除第10管为阴性对照管不加菌液外,其余9管均加入含细菌约1×103个的相应菌液0.1 mL。摇匀后将试管置37 ℃恒温培养箱中培养孵育。培养方法及时间同平板抑菌环试验。试验结束后观察记录结果,肉眼观察有无细菌生长。培养基澄清,表示无细菌生长；培养基混浊,表示有细菌生长。无菌生长的药物最高稀释度即为该药的MIC。
   
　　从上述无菌生长的试管中用接种环转接种于相应的平板培养基上,再作相应培养。平皿上菌落数＜5个的最小稀释度的药物浓度即为该药的最低杀菌浓度(MBC)。试验结果表明,紫英颗粒对临床分离的9种慢性盆腔炎常见致病菌均有良好的抑菌作用。对粪肠球菌和乙型溶血性链球菌的敏感性最好；对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和脆弱类的敏感性次之。详见表3。表3  紫英颗粒体外抑菌浓度测定结果(略)

　　3.2.2  平板抑菌环试验

　　参照文献[1]方法。取对数生长期的9种细菌,稀释至含细菌数9×106/mL个,分别用棉签取菌液,均匀涂布于相应固体培养基的无菌琼脂平板表面。每个平板用直径6 mm的打孔器打孔3个。每个菌种的平板分为2组。其中1组每孔用微量加样器加入含原药材2 g/mL的紫英颗粒药液50 μL；另一组加入同体积的相应阳性对照药。阳性对照药：脆弱类杆菌用0.5%甲硝唑,其余均用0.2%氧氟沙星。然后将平板置37 ℃恒温培养箱中培养孵育。脆弱类杆菌厌氧培养48 h,乙型溶血性链球菌常规培养24 h,其他菌常规培养9 h。取平板观察药物抑菌环直径。结果表明,紫英颗粒浓度对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、肺炎克雷伯菌、乙型溶血性链球菌和铜绿色假单胞菌均有较强的抑制作用,尤其是对脆弱类杆菌有较明显的抑制作用。按照药物敏感性评定标准,均达到了中度以上敏感。结果见表4。表4  紫英颗粒平板抑菌环试验结果(略)

　　4  讨论
   
　　慢性盆腔炎的西药治疗主要以抑菌消炎、改善病灶周围血氧供应和增强机体免疫力为主。抗菌治疗是目前最主要的方法。紫英颗粒对9种临床分离致病菌进行的抑菌试验结果表明,该药具有较广谱的抑菌作用。不同细菌对药物的敏感性依次为：粪肠球菌＞乙型溶血性链球菌＞大肠埃希菌＞金黄色葡萄球菌＞脆弱类杆菌＞变形杆菌＞表皮葡萄球菌＞肺炎克雷伯菌＞铜绿色假单胞菌。结果还显示,紫英颗粒对同一菌种不同菌株的MIC、MBC差异较小,提示紫英颗粒对细菌有较稳定的抑制作用,这将有助于临床中出现耐药菌株患者的治疗。体内试验也显示紫英颗粒有较好的抑菌作用,口服能明显提高大肠杆菌和金黄色葡萄球菌感染小鼠的存活率。有研究也表明,紫花地丁、蒲公英等均有较广谱的抑菌作用[2-3]。本研究结果为紫英颗粒临床应用提供了试验依据。

【参考文献】
  　[1] 李定刚,张武岗,宋毓民,等.紫花地丁抗菌活性成分研究[J].西北农林科技大学学报,2006,34(4)：87－89.

　　[2] 李仪奎.中药药理实验方法学[M].第2版.上海：上海科技出版社,2006. 755－756,758.

　　[3] 童延清,李 晖.紫花地丁、蒲公英体外抗菌作用研究[J].中华微生物学和免疫学杂志,2003,23(9)：669.